外泌體提取在短時(shí)間（一周之內(nèi)）使用,，可以放在4度保存，如果長(zhǎng)時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存,。也可以將外泌體進(jìn)行分裝,，分別放在-20度或-80度,。外泌體檢測(cè)方法：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體,。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物,，多角度進(jìn)行鑒定。l,、透射電鏡鑒定法：簡(jiǎn)稱TEM,，適合外泌體雙層囊膜超微結(jié)構(gòu)觀察，即通常為茶托型或一側(cè)凹陷的半球形,。2,、納米顆粒追蹤分析法：簡(jiǎn)稱NTA,，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度快,，檢測(cè)后能提供外泌體粒徑和濃度信息,。外泌體具有檢測(cè)包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可用于對(duì)心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測(cè),。湖南唾液外泌體

Knepper等通過對(duì)透射電鏡得到的200個(gè)囊泡進(jìn)行粒徑分析,，結(jié)果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35～40nm，磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5～1/10,。透射電鏡結(jié)合免疫金標(biāo)記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息,，有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機(jī)制與來源。動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering,，DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis,，NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法。兩者的不同之處在于動(dòng)態(tài)光散射通過檢測(cè)散射光的強(qiáng)度計(jì)算得到顆粒粒徑,，而納米顆粒跟蹤分析通過追蹤單個(gè)粒子的運(yùn)動(dòng)軌跡計(jì)算得到樣品濃度,、粒徑分布等信息。胸水外泌體PKH26外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1,、LAMP2。

流式細(xì)胞技術(shù)是細(xì)胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,，其用于外泌體定量檢測(cè)的準(zhǔn)確性也在不斷上升,。將外泌體表面特異性標(biāo)志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進(jìn)行標(biāo)記,，可用流式細(xì)胞儀檢測(cè)到陽(yáng)性表達(dá),，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)外泌體的定量。但流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)時(shí)需要單顆粒懸浮液,，當(dāng)外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時(shí)將導(dǎo)致一次觀察到多個(gè)顆粒,，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。因此,，為了通過流式細(xì)胞儀觀察,，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價(jià)結(jié)合固定在磁珠表面上,，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達(dá)的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中,。在流式細(xì)胞術(shù)之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡,。當(dāng)樣品通過流式細(xì)胞儀時(shí)采集熒光信號(hào),，不只可以對(duì)外泌體進(jìn)行高通量分析，還可以基于抗原表達(dá)對(duì)外泌體進(jìn)行定量或分類,。

幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體,，不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能,，這些外泌體參與了一系列生理和病理過程，如ai癥發(fā)生與發(fā)展,、抗原呈遞,、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等,。來自血細(xì)胞(包括血小板,、白細(xì)胞和紅細(xì)胞)的外泌體具有參與凝血、提供促血管生成因子,、誘導(dǎo)血管生成等生理功能;妊娠期外泌體能夠影響局部血管生成,、調(diào)節(jié)分化、激huo免疫,、促進(jìn)胚胎發(fā)育;肝臟細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體有利于維護(hù)肝臟內(nèi)穩(wěn)態(tài),。由此可見，正常細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體對(duì)維持機(jī)體的正常生命活動(dòng)起重要作用,。外泌體可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答,、抗原提呈、細(xì)胞遷移,、細(xì)胞分化等方方面面,。

細(xì)胞外囊泡是蛋白質(zhì)、mRNA,、miRNA和脂質(zhì)運(yùn)輸來完成細(xì)胞間通訊通路的重要媒介,，根據(jù)它們的大小和發(fā)生分為三類，包括外泌體,、微泡和凋亡小體,。其中，外泌體是直徑大約為40-100nm的包裝囊泡,，由多種細(xì)胞分泌,，內(nèi)含有特定的蛋白質(zhì)、脂質(zhì),、細(xì)胞因子或遺傳物質(zhì),。來源于不同的組織的外泌體不只具有其特異性蛋白分子，而且還包含其行使功能的關(guān)鍵分子,。近年來,，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及瘤子診療領(lǐng)域,、醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域,、寄生蟲領(lǐng)域；臨床研究上已涉及心血管系統(tǒng),、內(nèi)分泌代謝系統(tǒng)等,?；顑?nèi)的外泌體動(dòng)態(tài)（哪個(gè)外泌體遷移至何處）也會(huì)成為今后需要努力研究的重要課題。外泌體的發(fā)展

外泌體是分泌的細(xì)胞外囊泡的主要群體,，是具有生物活性的脂雙層囊泡,。湖南唾液外泌體

在當(dāng)代準(zhǔn)確醫(yī)療的大趨勢(shì)下，外泌體的發(fā)現(xiàn)和研究為肺病的早期診斷和醫(yī)治提供了嶄新的方向,。外泌體在液體活檢中的巨大潛力可以為肺病患者的早期發(fā)現(xiàn)和早期診療提供可靠依據(jù),。根據(jù)種瘤來源的外泌體在肺病的發(fā)發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用及相關(guān)機(jī)制的研究，臨床醫(yī)療人員可以針對(duì)不同的患者制定合適的醫(yī)治方案,，以達(dá)到改善肺病患者生存率,，延長(zhǎng)肺病患者生存時(shí)間的目的。但是,，針對(duì)外泌體的研究還存在諸多的問題有待廣大研究者解決,，如：外泌體的純化及標(biāo)記方法、如何尋找外泌體的靶基因,、外泌體的作用機(jī)制及信號(hào)通路等,。總而言之,，外泌體的研究有著廣闊的前景,，基于外泌體與肺病的研究，有望研發(fā)出能夠應(yīng)用于肺病臨床診斷和醫(yī)治的有效措施,，造福更多的患者,。湖南唾液外泌體

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