外泌體是各種細(xì)胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡,。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細(xì)胞具有交換信息的功能,。作為細(xì)胞間信號傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門,。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍,，但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實驗技術(shù),，關(guān)于需要改進(jìn)的課題存在很多,。例如，外泌體提純方法中,，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì),，給后續(xù)實驗產(chǎn)生了許多障礙?？贵w親和法和密度梯度離心法,，雖然可以提取到高純度的外泌體,，但不能提取完整外泌體,，無法分析外泌體具有的生理功能，也是兩種提取方法的問題所在,。而免疫印跡法（WB）和Elisa檢測法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測的一般方法,，又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達(dá)水平的標(biāo)記蛋白。外泌體的異質(zhì)性可以根據(jù)其大小,、含量(載物),、對受體細(xì)胞的功能影響以及細(xì)胞來源來區(qū)分。廣州體液外泌體

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一,，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單,、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快,。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,，捕捉外泌體的布朗運動,，實現(xiàn)顆粒可視化,。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外,，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體,，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體亞型隨著今后的研究發(fā)展,，外泌體功能逐步清晰,，并擴(kuò)大臨床應(yīng)用。

在免疫系統(tǒng)中,，淋巴細(xì)胞,、樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞,、肥大細(xì)胞等均可以產(chǎn)生外泌體,。研究表明免疫細(xì)胞來源的外泌體能夠明顯影響機體的免疫調(diào)節(jié)機制，包括調(diào)節(jié)抗原呈遞,、免疫激huo,、免疫監(jiān)督等。不同免疫細(xì)胞來源的外泌體功能不同,，以樹突狀細(xì)胞(該細(xì)胞具有免疫刺激能力,，是目前能夠激huo初始T細(xì)胞的抗原遞呈細(xì)胞)來源的外泌體為例，其外泌體的免疫刺激作用取決于來源細(xì)胞的成熟狀態(tài),。成熟的樹突狀細(xì)胞外泌體內(nèi)包含能夠直接激huoT細(xì)胞的MHCclassⅠ和MHCclassⅡ,，共刺激分子如CD40、CD8,、CD86和熱激蛋白,，這些分子使樹突狀細(xì)胞來源的外泌體具有抗原呈遞、調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的生物功能,。

外泌體的相關(guān)成分：1,、外泌體的膜同細(xì)胞一樣，是磷脂雙分子層,。2,、外泌體膜含有MHC-1/2蛋白,，能綁定特異性的肽鏈。3,、外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL,、LAMP1、LAMP2,。4,、外泌體膜中有膜轉(zhuǎn)運融合蛋白annexins、RAN,、GTPases,。5、外泌體膜上有脂質(zhì)筏Chol,、ceramide,、SM、PC,，限制膜流動,，參與包括跨膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、物質(zhì)內(nèi)吞,、脂質(zhì)及蛋白定向分選的多種功能,。6、外泌體中含有核酸,，包括miRNA,、DNA、lncRNA,、mRNA,；同時還有一些蛋白、脂類也能被包裹到外泌體中,。7,、與外泌體產(chǎn)生相關(guān)的重要分子：Ral、ARF6,、PLD2,、RAB家族,。8,、一些物質(zhì)進(jìn)行外泌體中是特異性的：如hnRNPA2B1能結(jié)合lncRNA或miRNA特異性的序列（GGAG/CCCU），進(jìn)行主動包埋,。超速離心是目前分離外泌體的主要技術(shù),。外泌體在心臟修復(fù)中起著關(guān)鍵作用。

外泌體調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機能,，延長毛發(fā)根部的囊生長期,，同時活化處于靜止期的毛發(fā)根部的囊,，使其提前進(jìn)入新的生長周期，實現(xiàn)了毛發(fā)的再次生長,。骨衰老小鼠注射外泌體試驗證明：年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發(fā)生機,。來源于脂肪組織中的干細(xì)胞分泌一些信號分子和生長因子，可以促使控制毛發(fā)根部的囊生長周期的毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞進(jìn)行分化,，向上遷移生成表皮細(xì)胞和皮脂腺,，向下遷移生成毛母細(xì)胞。毛發(fā)根部的囊的生長周期決定毛發(fā)的生長周期,，而毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的機能決定了毛發(fā)根部的囊的活躍程度,，外泌體靶向調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的功能。外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),。杭州外泌體脂質(zhì)組學(xué)

不同類別的外泌體囊泡有三個征：表面具涂層的膜泡,、內(nèi)含纖維的膜泡、電子致密囊泡,。廣州體液外泌體

為獲得外泌體的大小,、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息,，可以通過電鏡,、動態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀,、蛋白質(zhì)免疫印跡,、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細(xì)胞儀等對外泌體進(jìn)行表征,。通過電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息,，不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同，得到的外泌體形態(tài)存在差異,。例如,，在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中,，外泌體呈現(xiàn)囊泡獨有的茶托形,，可能由于樣品在固定或染色過程中極度脫水，導(dǎo)致外泌體塌陷所致,。與之相反,，在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形，由于不會脫水變性,，所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實狀態(tài),。另外，由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率,，也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度,、粒徑分布等信息,。廣州體液外泌體

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